１日目

1. ミヤコグサ種子を紙やすりで削った後、表面殺菌する。
2. 滅菌ろ紙上に種子を並べ発芽させる。（22℃、dark、３日）

３日目

1. 1/2 B5培地（セフォタキシムなし）を調製する。
2. 角型シャーレに流し込み固める。50 ml/plate

４日目

1. 根が0.2-0.5 cm出ている元気な実生を1/2 B5培地の下の方に並べる。
2. シャーレをシールせずに5シャーレずつまとめてテープをし横にした状態で培養する。（22℃、16/8h light/dark, 100 µmol s^-1m^-2）
3. フリーズストックAgrobacteriumをLB寒天培地（適当な抗生物質）2枚の全面にたっぷりまく。
4. Agrobacteriumを28℃で2日間培養する。

６日目

1. 15mlファルコンチューブに2mlYMB培地を加える。
2. LB寒天培地上のAgrobacteriumを滅菌薬さじ（小型薬さじ部分の側面がまっすぐなもの）を使って回収し、YMB培地に懸濁する。
3. ボルテックスしよく菌を懸濁させる。
4. 0.5mlの菌懸濁液を1mlシリンジに入れ27Gx3/4の針を取り付ける。
5. 滅菌ろ紙上を敷いたガラスシャーレに約5個体の実生を移す。（乾燥しないように数個体ずつ接種する。）
6. 胚軸の根から1-2mm上のところを27Gx3/4の針で垂直に刺す。
7. 菌懸濁液を1滴たらす。
8. 菌液をよく除いてから角型シャーレに戻す。（培地に埋め込まず、乗せる程度）
9. 5枚ずつまとめてアルミホイルに包む。
10. 横にしたまま22℃、16/8h light/darkで２晩培養する。

８日目

1. アルミホイルをはずし、下面をシールする。
2. 22℃、16/8h light/darkで５日間培養する。

１３日目

1. 1/2 B5培地（+ 150 µg/mlセフォタキシム）培地に移す。
2. 約1cmの毛状根が出るまで培養する。

※乾燥とカビが大敵である。毎日観察し、こまめに培地を交換した方がよい。カビが増えすぎた場合は、滅菌バーミキュライトに移植する。

２週間後

1. 2.5x対物レンズを用いてGFPまたはDsRedの確認を行う。
2. 根をかみそりで切り落とし、形質転換毛状根１本のみを残す。
3. 砂耕で栽培する。G. intraradicesを500 spores/plant接種する。
4. 2日に一度1/2 Hoagland (50 or 100 µM Pi)を施用する。
5. 3~4週間後に蛍光を発する根のみをサンプリングする。栽培期間が長くなると樹枝状体形成率が低下する。

0.3M K₂HPO₄./KH₂PO₄(pH6.8)