包埋 embedding

1. イソペンタンをあらかじめ-20℃で冷やしておく。chill isopentane at -20℃
2. 発泡スチロール箱に容器とトングを入れておく。prepare a container and tongs in a styrofoam cooler
3. ドライアイスを細かく砕き、発泡スチロール箱に入れておく。crush dry ices
4. 容器にイソペンタンとドライアイスを加える。add chilled isopentane and crushed dry ices in the container
5. カセットに試料を置き、OCTコンパウンドを加える。add samples and O.C.T. compounds in a cassette
6. トングでカセットをつまみ、カセットの凹んでいる部分をイソペンタンに浸す。dip the cassette into isopnetane
7. 凍結したら-80℃の冷凍庫に保管する。store at -80℃

 

切片作成 sectioning

1. 試料を-20℃の冷蔵庫にしばらく置いておく。place the sample in -20℃
2. クリオスタットのチャンバーと試料ヘッドを-20℃に冷却しておく。set temperature of a cryostat chamber and a sample head at -20℃
3. クライオ用の刃を装着する。set a knife for cryostat
4. 試料をカセットから取り出しすぐにチャンバー内に置く。place the embedded samples in the chamber
5. チャックにOCTコンパウンドを塗りすぐに試料を貼り付け、その上に重しを乗せる。coat chuck with O.C.T. compound and place the sample on the chuck
6. チャックを取り付ける。set the chuck on the cryostat
7. 切片の厚さをセットする。set thickness of sections
8. 薄切しながら試料を送り出す。do sectioning
9. 切れ始めたら全面が表れるまで切り進める。
10. カバーをして切片を作成する。make a section using the cover
11. コートスライドグラスを切片にあて回収する。place the section on a coated glass
12. 体温で温め切片を接着させる。warm the section to body temperature
13. 顕微鏡で切片を確認する。oberve the section with a microscope
14. 試料ヘッドの冷却を切り、チャンバー内の温度を上げる。turn off the cooler of sample head, and warm temperature in the chamber to -15℃
15. ハンドルをロックする。rock the handle